引言

随着畜牧养殖业的集约化发展，饲料中添加兽药以预防动物疾病的现象日益普遍。氯苯那敏和溴苯那敏作为抗组胺类药物，常被用于缓解动物过敏反应，但其过量残留可能通过食物链危害人类健康，并引发细菌耐药性风险。目前，欧盟、美国及中国均对饲料中药物残留制定了严格限量标准。因此，建立、准确的检测方法对保障饲料安全和规范行业管理具有重要意义。

检测范围

本检测方案适用于以下对象中氯苯那敏和溴苯那敏的定量分析：

• 猪、禽、水产等配合饲料及预混料
• 饲料原料（玉米、豆粕、鱼粉等）
• 饲料添加剂及功能性补充剂
• 动物源性饲料产品

检测项目及限量标准

目标检测物具有以下特征：

• 氯苯那敏（Chlorphenamine）：分子式C₁₆H₁₉ClN₂，脂溶性碱性化合物，残留限量≤0.05 mg/kg
• 溴苯那敏（Brompheniramine）：分子式C₁₆H₁₉BrN₂，代谢产物包括去甲溴苯那敏，总残留限值≤0.03 mg/kg

检测方法

样品前处理

采用改良的QuEChERS法进行样品预处理：

• 粉碎后的饲料样品过0.45 mm筛
• 乙腈-甲酸（95:5）混合溶液超声提取30分钟
• 经PSA和C18吸附剂净化去杂
• 氮吹浓缩后复溶于甲醇-水（1:1）溶液

仪器分析

主要采用两种联用技术进行检测：

• 液相色谱-紫外检测法（HPLC-UV）
  • 色谱柱：C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）
  • 流动相：乙腈-0.1%甲酸水梯度洗脱
  • 检测波长：265 nm（氯苯那敏）、272 nm（溴苯那敏）
• 液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）
  • 离子源：电喷雾电离（ESI+）模式
  • 特征离子对：氯苯那敏m/z 275→230，溴苯那敏m/z 319→274
  • 定量限可低至0.001 mg/kg

检测仪器配置

• 液相色谱仪（配DAD检测器）
• 三重四极杆质谱仪（MRM模式）
• 高速冷冻离心机（≥12000 rpm）
• 固相萃取装置（含C18和HLB柱）
• 旋转蒸发仪及氮吹浓缩仪

质量控制要点

• 采用同位素内标（D4-氯苯那敏）校正基质效应
• 每批次添加空白样品加标回收实验，回收率应控制在80%-120%
• 标准曲线相关系数R²≥0.999
• 平行样品相对标准偏差（RSD）≤10%

方法学验证

经系统验证，本方法满足以下技术参数：

• 线性范围：0.005-1.0 mg/kg
• 检出限（LOD）：HPLC法0.01 mg/kg，LC-MS/MS法0.002 mg/kg
• 加标回收率：85.3%-108.7%
• 日内精密度：3.2%-6.8%

结论

本研究建立的检测体系可有效实现饲料中氯苯那敏和溴苯那敏的痕量检测。相较于传统方法，LC-MS/MS技术具有更高的灵敏度和特异性，适用于法规限量监测；而HPLC-UV法则更适合企业自检和大批量筛查。建议检测实验室根据实际需求选择适宜方法，同时加强饲料生产过程中药物添加的全程监控，完善从原料到成品的质量追溯体系，共同保障动物源性食品安全。

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